超高效液相色谱-串联质谱结合化学计量学分析金银花中多组分含量

doi:10.3976/j.issn.1002-4026.2023.05.001

摘要/Abstract

摘要：

建立超高效液相色谱-串联质谱同时测定金银花中9种主要成分的方法。采用负离子扫描方式,对主要成分进行化学计量学分析。色谱分离采用 Thermo Hypersil GOLD 色谱柱,柱温35 ℃。流动相由甲醇和 0.2% 甲酸水溶液组成,结合聚类热图分析和主成分分析对金银花进行综合分析。结果表明: 9个化合物峰面积与浓度之间具有良好的线性关系(R²>0.999 1),日内精密度(0.96%~2.26%)、日间精密度(0.52%~3.04%)和稳定性(0.85%~2.15%)均符合相对标准偏差;回收率在96.77%~101.94%之间,相对标准偏差在2.48%~4.01%之间;层次聚类分析和主成分分析在内的化学计量学结果表明,不同地区的金银花活性成分含量存在明显差异,3-O-咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸为贡献最大的化合物。该研究可为进一步开展金银花有效成分及相关量效关系、相关产品的质量控制提供参考。

关键词: 金银花, 超高效液相色谱-串联质谱, 化学计量学, 多成分, 含量测定

Abstract:

This study aimed to devise a methodology for the simultaneous determination of the contents of nine primary components in Lonicerae japonicae flos through ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The chemometric analysis of the nine primary components was performed via negative ion scanning. Further, chromatographic separation was performed on a Thermo Hypersil GOLD column at a temperature of 35 ℃. The mobile phase comprised methanol and water containing 0.2% formic acid, as determined through the cluster thermogram and principal component analyses of Lonicerae japonicae flos. The peak areas with concentrations of nine components exhibited a good linear relationship (R²>0.999 1), and the intraday (0.96%~2.26%) and interday (0.52%~3.04%) precisions and stability values (0.85%~2.15%) agreed well with relative standard deviation (RSD). The recovery rate was between 96.77% and 101.94%, and the RSD was between 2.48% and 4.01%. The results of the chemometric, hierarchical cluster, and principal component analyses revealed that there were considerable differences in the contents of the active ingredients of Lonicerae Japonicae Flos from various regions, and 3-O-caffeoylquinic acid and 3,5-dicaffeoylquinic acid were considered as the dominant compounds. UPLC-MS/MS quantitative and chemometric analyses of Lonicerae Japonicae Flos performed herein may provide a reference for the modernization of and innovative research on the effective ingredients of Lonicerae Japonicae Flos and related quantity effect relations as well as the quality control of related products.

Key words: Lonicerae japonicae flos, UPLC-MS/MS, chemometrics, multicomponent, assay

中图分类号:

R284.1

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图/表 7

表1

表2

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表3

表4

图2

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参考文献 14

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批次	来源	批次	来源
20211123	广东	20210310	湖南
20211205	河北	20220511	江西
20211207	河南	20220512	山东
20220406	湖北	20220323	云南
20220314	湖南	20220517	云南

化合物	分子式	离子模式	保留时间/min	母离子(m/z)	碎片离子(m/z)	碰撞能量/eV
3,4-二羟基苯甲酸	C₇H₆O₄	负离子	1.06	153	109	14
5-O-咖啡酰奎宁酸	C₁₆H₁₈O₉	负离子	1.16	353	191	19
3-O-咖啡酰奎宁酸	C₁₆H₁₈O₉	负离子	2.29	353	191	17
咖啡酸	C₉H₈O₄	负离子	4.34	179	135	16
4-O-咖啡酰奎宁酸	C₁₆H₁₈O₉	负离子	4.46	353	179	16
氯霉素(内标)	C₁₁H₁₂C_l7N₂	负离子	9.37	321	257	10
3,5-二咖啡酰奎宁酸	C₂₅H₂₄O₁₂	负离子	4.58	515	353	15
木犀草苷	C₂₁H₂₀O₁₁	负离子	4.61	448	286	26
芦丁	C₂₇H₃₀O₁₆	负离子	4.73	610	301	35
4,5-二咖啡酰奎宁酸	C₂₅H₂₄O₁₂	负离子	4.93	515	353	18

成分	回归方程	r	线性范围/(μg ·mL^-1)	检测限/(ng ·mL^-1)	定量限/(ng ·mL^-1)
3,4-二羟基苯甲酸	Y=6.715 7 X-0.034 4	0.999 8	0.004 5~1.826 3	1.37	4.57
5-O-咖啡酰奎宁酸	Y=4.139 4 X -0.016 4	0.999 6	0.006 6~75.637 3	1.98	6.61
3-O-咖啡酰奎宁酸	Y=2.856 9 X-0.009 3	0.999 7	0.009 5~312.535	2.88	9.58
咖啡酸	Y=14.065 0 X-0.100 8	0.999 8	0.009 5~1.246 6	2.86	9.54
4-O-咖啡酰奎宁酸	Y=3.776 2 X-0.006 6	0.999 9	0.006 4~15.527 2	1.93	6.45
3,5-二咖啡酰奎宁酸	Y=16.743 0 X-0.010 9	0.999 1	0.003 9~145.878 4	1.20	3.99
木犀草苷	Y=6.845 6 X+0.081 9	0.999 8	0.000 3~1.818 6	0.01	0.03
芦丁	Y=2.464 0 X+0.103 5	0.999 4	0.001 8~61.428 2	0.56	1.86
4,5-二咖啡酰奎宁酸	Y=9.180 7 X+0.347 7	0.999 5	0.010 6~44.093 0	3.18	10.61

批号	来源	w(3,4-二羟基苯甲酸)	w(5-O-咖啡酰奎宁酸)	w(3-O-咖啡酰奎宁酸)	w(咖啡酸)	w(4-O-咖啡酰奎宁酸)
S1	广东	19.95±2.29	2 365.50±351.77	21 175.88±3 070.57	32.59±3.25	850.07±128.49
S2	河北	29.97±1.71	1 577.05±56.30	8 568.23±364.81	122.74±2.47	410.15±23.08
S3	河南	10.87±0.70	704.09±43.86	14 214.40±1 268.23	43.83±3.16	307.77±32.46
S4	湖北	10.62±0.63	432.83±27.19	15 099.34±800.99	46.15±3.23	252.85±18.87
S5	湖南	17.11±1.74	2 976.40±347.57	24 671.69±2 766.42	29.50±2.14	828.02±106.44
S6	湖南	9.39±0.45	850.23±40.05	12 382.72±533.63	52.14±1.77	292.94±21.14
S7	江西	107.69±5.66	1 049.78±70.85	6 700.19±519.86	46.98±2.76	236.30±22.00
S8	山东	12.96±1.23	394.94±42.51	7 234.04±707.02	63.59±5.12	186.61±14.83
S9	云南	42.99±1.45	6 337.80±223.87	49 145.96±2 258.69	61.63±3.95	2 127.96±91.56
S10	云南	33.26±2.57	736.35±110.90	20 937.39±2 639.06	164.28±15.59	298.79±36.98
S1	广东	1 315.93±1 789.38	67.24±4.50	66.98±7.86	2 115.67±244.61
S2	河北	5 047.84±225.44	15.51±0.29	191.39±12.34	514.12±20.89
S3	河南	5 597.36±554.37	185.38±9.30	752.22±70.53	890.05±77.64
S4	湖北	6 403.77±530.37	213.59±10.69	645.33±51.29	1 030.68±50.47
S5	湖南	14 855.06±865.38	48.57±0.12	64.34±5.40	2 106.27±238.60
S6	湖南	5 796.65±276.04	180.80±5.60	476.82±26.59	816.25±15.49
S7	江西	4 349.02±143.52	14.00±1.50	6 996.23±337.24	420.45±9.97
S8	山东	3 711.80±413.37	136.13±12.03	299.90±25.89	575.37±62.33
S9	云南	25 866.46±1 592.72	133.17±4.99	75.59±11.54	4 109.72±204.62
S10	云南	13 245.68±908.72	67.07±8.13	943.77±110.14	1 251.82±163.55

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